微滴式数字PCR系统在传统PCR方法基础上采用一种被称为“第三代PCR”的全新方法进行核酸分子的定量,与传统PCR、定量PCR相比,其结果的精 准度、准确性和灵敏度更佳,定量PCR检测灵敏度的极限一般在1%,微滴式数字PCR系统特别适合拷贝数变异、突变检测和基因相对表达等方面的研究,并对遗传病、癌症、传染病的研究提供了一种全新的技术思路与手段。
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微滴式数字PCR系统应用领域及功能
在PCR扩增前的微滴化处理步骤,使得该系统能以绝 对定量的方式直接“数”出核酸靶分子的个数,因此特别适用于依靠传统荧光定量实时PCR技术不能很好达到分辨和精准定量效果的应用领域:
拷贝数变异即CNV研究
稀有序列检测如肿瘤微量突变基因检测、病毒检测及无创产前诊断等
质粒标准品绝 对定量
微量基因如miRNA表达分析
微小差异基因相对表达研究如等位基因不平衡表达
二代测序文库定量及结果验证
微滴式数字PCR系统特点介绍:
1.采用“油包水”的微滴化结构将定量反应体系进行上万次的微分化处理;
2.现有的TaqMan方法可直接应用,可进行单通道或双通道检测;
3.微滴发生器一次处理8个样品,约2.5分钟生成约20,000个纳升级微滴;
4.微滴分析仪一次分析1~96个样品,分析速度为32个样品/小时,全程自动无需人工干预;
5.操作简单,不依赖芯片,实验成本相对较低;
6.支持染料法检测,进一步降低了实验成本;
7.无需标准品(标准曲线)即可确定靶分子的起始浓度或拷贝数;
8.有效区分浓度差异微小(1.2×)的样品;
9.检测含量极低的核酸序列,灵敏度可达0.001%。
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