微滴式数字PCR系统在传统的PCR扩增前对样品进行微滴化处理,即将含有核酸分子的反应体系分成成千上万个纳升级的微滴,其中每个微滴或不含待检核酸靶分子,或者含有一个至数个待检核酸靶分子。经PCR扩增后,逐个对每个微滴进行检测,有荧光信号的微滴判读为1,没有荧光信号的微滴判读为0,根据泊松分布原理及阳性微滴的个数与比例即可得出靶分子的起始拷贝数或浓度。
微滴式数字PCR系统与传统PCR相比所具有的优势:
微滴式数字PCR系统不依赖Ct值或内参基因,即可确定低至单拷贝的待检靶分子的绝 对数目。微滴技术让数字PCR更低成本,且更实用。
微滴式数字PCR系统大致的应用方向:
微滴式数字PCR系统适合于拷贝数变异研究、复杂来源样品中含量极低核酸分子的检测、NGS数据验证、NGS测序文库的鉴定、miRNA等差异微小的基因表达研究。
微滴式数字PCR系统技术指标:
起始样品大小,20µl; QX200 微滴生成仪容量:1–8 个样品 每 20 µl 样品的微滴数:1–96 个样品 样品光源:发光二极管 样品检测:多像素光子计数器 检测通道:FAM (EvaGreen)、HEX (VIC) 线性动态范围:5 数量级 精度:±10% 每个 96 孔板的液滴数:百万1.5 QX200 微滴生成仪尺寸(宽 x 深 x 高):28 x 36 x 13 cm (11 x 14 x 5) QX200 微滴分析仪尺寸(宽 x 深 x 高):66 x 52 x 29 cm (26 x 20 x 11) 容量:1–96样品。
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