微滴式数字PCR系统的优点

自微滴式数字PCR系统的技术发明以来，已经经过很多的变革，由最初的普通PCR，到现在大家还在用的实时定量PCR，再到近几年兴起的微滴数字PCR，都是研究者对于结果数据要求越来越高的体现，我想做过实时定量PCR的宝 宝们都被它的重复性差折磨过，尤其是对于一些微小的差异，实时定量PCR的弊端尤为显著。今天给大家介绍的是比实时定量更为灵敏和精 准的一种PCR方法--微滴数字PCR。为了让大家更好的理解这种方法，我先来说说它基于的实验原理。

下面给大家分享微滴式数字PCR系统的优点有哪些，我们一起看看吧。

1.定量癌症标志物

与野生型DNA的背景下，癌症相关突变因浓度低，往往逃过检测。微滴式数字PCR系统以其高灵敏度，能够轻松定量低至0.0001%的突变，这是其他方法无法做到的。之前，MolecularMD公司利用QX100 ddPCR系统，开发出肺癌EGFR微创诊断技术。他们认为，QX100是检测稀有事件（如T790M突变）的理想工具，其灵敏度高于real-time PCR十倍左右。

2.区分基因组变异

拷贝数变异（CNV）是人类基因组中个体差异的一个重要来源。CNV与癌症、神经和自身免疫疾病以及药物的不良反应存在关联。可靠地鉴定此类CNV，也代表了前沿研究中一种重要的能力。

3.研究病毒载量

在确定疾病状态和开发有效疗法时，精确地定量病毒载量至关重要。病毒库不断波动，有时会降至极低的水平。在研究许多不同的病原体时，成功和失败之间也许就一步之遥，那就是能够准确重复地测定病毒DNA或RNA。之前，美国密西西比州一名出生时携带艾滋病毒的婴儿，经过抗逆转录病毒的治 疗，已经被“功能性治愈”。在这个案例中，ddPCR平台发挥了重要的作用。研究人员表示，它通过将样品随机分布在上万个微滴中进行PCR扩增，从而确保了高度灵敏而准确的HIV DNA低拷贝分析。

4.新一代测序的验证

在新一代测序的样品制备中，准确定量测序文库很关键，这可保证测序平台的高效利用。若测序运行时的文库分子过多或过少，都会使数据质量受损，有时甚至没有数据。这不仅浪费宝贵的样品和试剂，也浪费用户和仪器的时间。QX200 ddPCR系统可以融入NGS的文库制备流程中，精确定量测序文库。

美国福瑞德?哈金森癌症研究中心的研究人员去年在《BioTechniques》杂志上发表文章，称ddPCR可作为一种精确的方法，用于NGS文库的质量控制。

5.基因表达分析

准确定量样品中存在的RNA转录本，有助于更好地了解基因表达和调控。ddPCR系统以其高灵敏度，特别适合发现和定量稀有转录本，让研究人员更深入地探究单细胞转录组学，并更好地了解RNA的实际功能。同时，其高精确度也使其能够检测样品之间基因表达的微小变化。去年发表在《Nature Methods》上的一篇文章称，ddPCR技术能在不同情况下，准确重复地定量血浆和血清中的microRNA。作者认为：“ddPCR能帮助我们更加精确地追踪病人在治 疗期间不同时间段中的血清microRNA浓度变化情况，这对于实时PCR来说，有时是不可能实现的。”还有转基因检测环境检测等功能，由于篇幅原因，就不赘述了。

总体来说，微滴式数字PCR系统的优点就是能够准确灵敏地检测出微量基因的变化及差异，提供给我们更可靠的数据，尤其是在临床医学研究领域其作用非常重要。